Isolering af DNA fra løg

Formålet: At isolere DNA fra kiwicellerne.

Fremgangsmåden:

1. Først tilsat vi 3 g NaCl (salt) til opvaskemidlet, og fyldte destilleret vand i ml glasset, så det nåede op på 100 ml. NaCl stabilisere DNA og opvaskemiddelet opløser cellemembranen.

2. Vi skar en kiwi i små stykker og hældte stykkerne ned i et bægerglas, hvorefter vi overhældte dem med vaskemiddel og salt-opløsningen.

3. Blandingen blev rørt sammen og stillet i et 60 grader varmt vandbad, i præcis 15 minutter.
Det varme vand opløser cellemembranen bedre end koldt vand. Hvis blandingen havde stået der længere tid en 15 minutter, ville DNA'en gå i stykker.

4. Bagefter skulle blandingen køles ned på et isbad i 5 minutter, hvor vi jævnligt skulle røre rundt i blandingen. Det kolde vand stopper enzymerne, som kunne "klippe" DNA'en i stykker.

5. Derefter blev blandingen blendet, hvilket resulterer i at cellevæggene af ækulose smadres.

6. Det blendede resterende filtreres i et kaffefilter, filtratet indeholdte så opløselige proteiner og DNA.
Hvis man blender mere end 5 minutter, vil DNA molekylerne ødelægges.

Adskillelse af DNA fra kiwi-ekstraktet

1. Vi hældte 6 ml af kiwi-ekstrakten over i et stort reagensglas og tilsatte ca. 2-3 dråber protease, og blandede det godt sammen. Proteasen nedbryder opløselige proteiner.

2. Så tilsatte vi 9 ml iskold 96% ethanol til vores ekstrakt, ved at hælde det forsigtig ned langs siden af vores reagensglas. Ethanolen måtte ikke blive blandet sammen med kiwi-ekstrakten, men skulle lægge sig som et lag oven på. Så skulle det stå 2-3 minutter.
DNA er uopløselig i iskold ethanol, og der vil forekomme bobler, mens de resterende proteiner opløses. DNA vil fælde ud i kiwi-ekstraktet og stige op til ethanolen som en hvid tåge.

3. Derefter kan man forsigtigt vikle DNA op på f.eks. en glasspatel.
Vi fik desværre ikke taget noget billede, af DNA'en oprullet om en glasspatel.

På nr. 2 billede ses det tydeligt at DNA'en er steget op til alkoholen.
Formålet er gennemført, vi har nu isoleret DNA fra kiwicellerne.


Lavet af Cecilia J.S. 1.y Himmelev Gymnasium